Isolierung von Mikroglia aus demyelinisierenden Läsionen des Mausgehirns mittels magnetisch aktivierter Zellsortierung

Präparieren Sie gefärbte demyelinisierende Läsionen aus dem Corpus callosum eines Mausgehirns.

Diese Läsionen enthalten hirnresidente Mikroglia, die das Zelloberflächenintegrin CD11b exprimieren.

Entnehmen Sie das Gewebe und fügen Sie eine Lösung hinzu, die ein proteolytisches Enzym und DNase enthält.

Das Enzym baut die extrazelluläre Matrix ab, während DNase freie DNA abbaut.

Fügen Sie kalten Puffer hinzu und filtrieren Sie die Suspension durch ein Sieb, um Zellklumpen zu entfernen.

Zentrifugieren, den Überstand verwerfen und die pelletierten Zellen in einem Dichtegradientenmedium resuspendieren.

Mit Puffer und Zentrifuge überlagern, um verbleibende Ablagerungen in den oberen Schichten aufzufangen; intakte Zellen setzen sich am Boden ab.

Entfernen Sie die Ablagerungen und suspendieren Sie die Zellen in einem Puffer

.

Fügen Sie Anti-CD11b-Magnetkügelchen hinzu, um die Mikroglia zu markieren.

Laden Sie die Zellen auf eine Säule mit ferromagnetischen Kugeln, die im Magnetfeld des Magnetabscheiders platziert sind.

Unter dem äußeren Magnetfeld werden die kügelchengebundenen Mikroglia in der Säule zurückgehalten, während ungebundene Zellen hindurchströmen.

Entfernen Sie die Säule aus dem