Isolierung von Zellpopulationen aus Hirngewebe mittels fluoreszenzaktivierter Zellkernsortierung

Übertragen Sie ein Stück frisch gefrorenes menschliches Hirngewebe in eine geeignete Mühle, die Kältelysepuffer enthält.

Bewegen Sie den Stößel auf und ab, um das Gewebe mechanisch zu brechen und die Zellen freizusetzen.

Die Detergensmoleküle im Lysepuffer brechen die Zellmembran auf und geben die Zellkerne frei.

Übertragen Sie den Inhalt in ein geeignetes Zentrifugenröhrchen und geben Sie kalten Saccharosepuffer auf den Boden des Röhrchens, wodurch ein Dichtegradient entsteht.

Zentrifugieren Sie mit hoher Geschwindigkeit, um die Kerne am Boden des Röhrchens zu trennen.

Den Überstand verwerfen und die Zellkerne in einer gepufferten Kochsalzlösung resuspendieren.

Fügen Sie den Zellkernen zielspezifische Fluorophor-konjugierte Antikörper hinzu und inkubieren Sie, damit der Antikörper an sein Kernprotein binden kann.

Fügen Sie Kernfärbefarbstoff hinzu, um die intakte DNA sichtbar zu machen.

Führen Sie eine fluoreszenzaktivierte Zellkernsortierung durch, um die Zellkerne verschiedener Zellpopulationen basierend auf unterschiedlichen Fluoreszenzsignalen zu sortieren.

Beginnen Sie mit der Präparierung von etwa 200 bis 400 Milligramm Gewebe aus einer frischen, gefrorenen Gewebeprobe des e