Gewinnung verschiedener neuronaler Zellpopulationen aus einem Hippocampus einer Ratte

Nehmen Sie perfundierte Hippocampus-Fragmente von Ratten.

Inkubieren Sie mit Papain, um die extrazelluläre Matrix des Gewebes zu verdauen und Zellen, einschließlich Neuronen, Astrozyten und Mikroglia, zu lockern.

DNase zugeben und mischen.

Dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch mit Pipetten mit zunehmend abnehmendem Durchmesser, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Inkubieren, damit die DNase kontaminierende DNA abbauen kann.

Führen Sie die Suspension durch ein Sieb und entfernen Sie Ablagerungen.

Fügen Sie Puffer mit zweiwertigen Ionen hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen.

Zentrifugieren und den enzymreichen Überstand entfernen.

Fügen Sie nun Puffer und Anti-Myelin-Magnetkügelchen hinzu. Inkubieren Sie für die Kügelchen, um die Myelintrümmer zu binden.

Nach der Inkubation zentrifugieren und den Überstand entfernen.

Das Gemisch wird wieder in einen Puffer suspendiert und auf eine magnetische Trennsäule geladen, die ferromagnetische Kugeln enthält, die im Magnetfeld des Magnetsortierers platziert sind.

Das Magnetfeld hält magnetische beadgebundene Myelintrümmer in der Säule zurück, während myelinfreie Zellen hindurchgehen.

Waschen Sie die Säule mit Puffer und sammeln