JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:29 Min. • July 8th, 2025
Entnehmen Sie das Rückenmark von Mäusen und schneiden Sie sie in Fragmente.
Übertragen Sie die Fragmente in ein Röhrchen, das ein proteolytisches Enzym und DNase enthält. Vortexen und inkubieren.
Das Enzym verdaut die extrazelluläre Matrix des Gewebes, während DNase kontaminierende freie DNA abbaut.
Erneut vortexen und wiederholt pipettieren, um die Dissoziation des Gewebes abzuschließen und eine Einzelzellsuspension zu erhalten.
Zentrifugieren und den Überstand entfernen. Resuspendieren Sie die Zellen in einer Lösung, die DNase und einen Proteaseinhibitor enthält, und wirbeln Sie sie auf. Der Inhibitor neutralisiert das Enzym.
Schichten Sie frische Inhibitorlösung auf die Oberseite, zentrifugieren Sie sie und entfernen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie die Zellen in Dichtegradientenmedien, Vortex und zentrifugieren Sie dann.
Die Zellen siedeln sich unten an, während die Myelintrümmer oben verbleiben.
Entsorgen Sie den Rest. Wiederholt mit Puffer waschen, zentrifugieren und den Überstand entfernen. Resuspendieren Sie die Zellen in Wachstumsmedien.
Plattieren Sie die Zellen. Die unbeschichtete Oberfläche erleichtert die Anheftung von Gliazellen.
Entfernen Sie das verbrauchte Med
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