Differenzierung immortalisierter multipotenter otischer Vorläuferzellen in spiralförmige Ganglienneuronen und Bewertung der Differenzierung

Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit sterilen Deckgläsern, die mit einem Zellkultursubstrat beschichtet sind.

Einführung von immortalisierten multipotenten otischen Vorläuferzellen (iMOPs) in einem neuronalen Differenzierungsmedium.

iMOPs sind Vorläufer verschiedener Innenohrzellen, einschließlich Spiralganglien-Neuronen (SGNs), die auditive Informationen an das Gehirn übertragen.

Inkubieren Sie und lassen Sie die Zellen am Substrat haften. Das Medium bewirkt eine Differenzierung der iMOPs in SGNs.

Fügen Sie ein Fixiermittel hinzu, um die Proteinvernetzung zu induzieren, die Zellmorphologie zu erhalten, und eine Detergenslösung, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.

Führen Sie ein blockierendes Reagenz ein, um eine unspezifische Markierung zu verhindern.

Fügen Sie Fluorophor-konjugierte Antikörper hinzu, die spezifisch für neuronale Differenzierungsmarker sind, und inkubieren Sie, damit die Antikörper die SGNs markieren können.

Waschen Sie, um ungebundene Antikörper zu entfernen, und montieren Sie die Deckgläser mit einem Eindeckmedium, das einen fluoreszierenden Kernfleck enthält.

Detektieren Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie die Antikörpersignale, um die Differenzieru