Ex-vivo-Kultur und Bildgebung von okulomotorischen Schnitten aus transgenen Mausembryonen

Nehmen Sie eine transgene schwangere Maus, isolieren Sie chirurgisch die Gebärmutter mit Embryonen und waschen Sie sie, um Blutreste zu entfernen.

Entnehmen Sie die Embryonen mit fluoreszenzmarkierten Motoneuronen und übertragen Sie sie auf den Deckel einer Multiwell-Platte.

Fügen Sie geschmolzene Agarose hinzu und kühlen Sie den Deckel, um die Gelbildung zu induzieren und die Embryonen einzubetten.

Richten Sie unter einem Fluoreszenzmikroskop die okulomotorischen Kerne und die Augen in einer Linie aus und trimmen Sie die Agarose parallel zur Linie.

Fixieren Sie einen Embryo auf einem Probentisch und legen Sie ihn in eine Vibratomkammer, die mit einem Kaltschneidepuffer gefüllt ist.

Erzeugen Sie mit dem Vibratom Schnitte, die die okulomotorischen Kerne und Augen enthalten. Die Kerne bilden die okulomotorischen Nerven, die die Augenbewegung steuern.

Übertragen Sie die Scheiben auf Kultureinsätze in einer Multi-Well-Platte, die ein Kulturmedium enthält, und inkubieren Sie.

Nehmen Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop in regelmäßigen Abständen Bilder auf, um die fluoreszenzmarkierten okulomotorischen Neuronen zu beobachten, die Axone bis zu den Augen ausdehnen.

Bevor Sie mit dem Eingriff