Differenzierung von humaninduzierten pluripotenten Stammzellen in mikrovaskuläre Endothelzellen des Gehirns

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die humaninduzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) in einem Medium mit einem Rho-Kinase-Inhibitor enthält, der das Überleben der Zellen fördert.

Ersetzen Sie das Medium durch ein essentielles Medium, das Nährstoffe und Wachstumsfaktoren enthält.

Inkubieren, um die Proliferation und Differenzierung von iPS-Zellen in Vorläuferzellen zu ermöglichen.

Ersetzen Sie dieses Medium durch ein Differenzierungsmedium, das mit Fibroblasten-Wachstumsfaktoren und Retinsäure ergänzt ist, und inkubieren Sie dann.

Die Wachstumsfaktoren erleichtern die Differenzierung von Vorläuferzellen zu mikrovaskulären Endothelzellen, während Retinsäure die Synthese von Tight-Junction-Proteinen fördert.

Waschen und behandeln Sie die Zellen mit einer Enzym-EDTA-Lösung, um die Zellen zu lösen und eine Einzelzellsuspension zu erzeugen.

Zentrifuge, um die Zellen zu sammeln und den Überstand zu entfernen. Dann resuspendieren Sie die Zellen in einem frischen Differenzierungsmedium.

Aussaat dieser Zellsuspension in eine Multi-Well-Platte, die mit Kollagen und Adhäsionsproteinen beschichtet ist.

Inkubieren, um die Zelladhäsion zu ermöglichen, und enge Verbindungen zwischen den