Isolierung und Kultivierung von Zellen aus dorsolateralen Telencephalonen von Mausembryonen

Nehmen Sie einen Mausembryo in einen Puffer und trennen Sie den Schädel, um das Gehirn zu isolieren.

Entfernen Sie die Hirnhäute, die membranöse Schicht, die das Gehirn bedeckt.

Präpariere das Gehirn, um die Hemisphären zu trennen.

Isolieren Sie die dorsolateralen Telencephalonen von den Hemisphären und übertragen Sie sie in eine Röhre.

Die dorsolateralen Telencephalons sind reich an Neuronen und neuralen Vorläuferzellen.

Zentrifugieren und den Überstand entfernen.

Füge eine Enzymlösung hinzu. Die Enzyme brechen die Gewebematrix auf und lockern die Zellen auf.

Führen Sie ein Proliferationsmedium ein, das Serum enthält. Die Serumproteine hemmen die Enzymaktivität.

Verwenden Sie eine Pipette, um das Gewebe mechanisch zu dissoziieren und eine Zellsuspension zu bilden.

Zentrifugieren und entfernen Sie den Überstand, der inaktivierte Enzyme und Gewebereste enthält.

Resuspendieren Sie die Zellen im Proliferationsmedium.

Übertragen Sie die Zellen auf eine mit Zellkultursubstrat beschichtete Mikroplatte.

Inkubieren, damit die Zellen am Substrat haften. Das Medium erleichtert die Proliferation von Vorläuferzellen.

Beginnen Sie mit der Entnahme der Gehirne von 5 bis 10 E14-Embryonen in einer