Etablierung einer primären Zellkultur der Spinalganglien der Dorsalwurzel aus einer Wirbelsäule der Ratte
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:18 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Wirbelsäule einer Ratte. Machen Sie zwei Schnitte an den Seiten und einen seitlichen Schnitt.
Entfernen Sie die Rückenmuskulatur und den dorsalen Teil der Wirbel.
Entnehmen Sie das Rückenmark.
Identifizieren Sie die Spinalganglien oder DRGs, die sich bilateral entlang der Lendenwirbel befinden.
Die DRGs enthalten Neuronen, die von Gliazellen umgeben sind.
Die DRGs herausnehmen und in einer Schüssel auffangen. Waschen Sie das Tuch wiederholt mit serumfreien Medien.
Übertragen Sie die DRGs auf eine Platte mit Kollagenaselösung und inkubieren Sie. Kollagenase baut die extrazelluläre Matrix ab.
Mit Puffer waschen. Fügen Sie Trypsin-EDTA hinzu und inkubieren Sie, um Zell-Zell-Verbindungen zu stören und die Zellen zu lockern.
Übertragen Sie die DRGs in ein Röhrchen, zentrifugieren Sie und entsorgen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie das Gewebe in Nährmedien und pipettieren Sie wiederholt, um die Zellen freizusetzen.
Übertragen Sie die Zellen auf eine polymerbeschichtete Kulturplatte, um die Anheftung zu erleichtern.
Entfernen Sie das Medium und fügen Sie frische Medien hinzu, die Inhibitoren und Wachstumsfaktoren enthalten.
Die Inhibitoren begrenzen die Proliferation v
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