Dissektion und Montage von Explantaten aus Fruchtfliegenlarven

Beginnen Sie mit den Larven von Drosophila, einer Fruchtfliege, in einer physiologischen Kochsalzlösung in einer Schale. Die Lösung verhindert, dass die Larven austrocknen.

Lokalisieren Sie unter einem Präpariermikroskop das vordere Ende der Larven mit den Mundhaken.

Das vordere Ende enthält die Augenscheiben und das zentrale Nervensystem (ZNS), das aus den Hirnlappen und einem ventralen Nervenstrang besteht.

Halten Sie das hintere Ende der Larve mit einer Pinzette. Ziehen Sie mit einer weiteren Pinzette am vorderen Ende, um die inneren Organe zu extrahieren.

Entfernen Sie den Darm und die anhaftenden Muskeln, um das ZNS zu isolieren, das an den Augenscheiben befestigt ist.

Um das Hirnexplantat zu montieren, übertragen Sie das extrahierte Gewebe auf die Kochsalzlösung, die in einer Fettbarriere auf einem Objektträger eingeschlossen ist.

Stellen Sie sicher, dass die dorsale Seite des Explantats nach oben zeigt, und versiegeln Sie das Gewebe mit einem Deckglas. Das Explantat des Gehirns ist bereit für die Analyse.

Um Gehirne von Drosophila-Larven zu gewinnen, verwenden Sie unter einem Präpariermikroskop ein Paar Standard-Dissektionszangen mit der Nummer 5, um eine Larvenprobe an Ort und Stelle zu halten, während Sie mit der anderen das Gehirn vorsichtig aussezieren, wobei die Augenscheiben, Hirnlappen und der ventrale Nervenstrang erhalten bleiben. Entfernen Sie dann die anhaftenden Muskeln, um Bewegungen der Probe während der Bildgebung zu minimieren. Wenn alle Gehirne entnommen wurden, ziehen Sie mit Vakuumfett eine quadratische Kammer auf einen Objektträger und geben Sie 20 Mikroliter externe Kochsalzlösung in die Kammer.

Übertragen Sie das Gehirn mit der Pinzette in die Kammer und passen Sie die Positionen des Gehirns unter dem Mikroskop an, wobei die Rückenseiten nach oben zeigen. Decken Sie die Kammer mit einem Glasdeckglas ab und drücken Sie vorsichtig auf das Deckglas, um das Abdriften der Probe während des Bildgebungsverfahrens zu reduzieren.