Differenzierung von induzierten pluripotenten Stammzellen in neurale Vorläuferzellen

Nehmen Sie eine Mikrotiterplatte, die eine adhärente Kultur von embryonalen Fibroblasten (MEFs) der Maus in einem Medium enthält.

Die adhärenten MEFs fungieren als Feeder-Schicht und bieten eine unterstützende Zellkultur-Mikroumgebung.

Entfernen Sie das Medium und geben Sie humane induzierte pluripotente Stammzellen (hiPSCs) in ein hiPSC-Medium, das mit kleinen Molekülen ergänzt ist, die das Überleben der Zellen verbessern.

Inkubieren, damit die hiPS-Zellen an der Feeder-Schicht haften können, die Wachstumsfaktoren sezerniert, die die Proliferation von hiPS-Zellen erleichtern.

Entfernen Sie das Medium und fügen Sie eine Enzymlösung hinzu, um die Zellen zu lösen. Übertragen Sie die Zellen und zentrifugieren Sie sie, entfernen Sie dann den Überstand und resuspendieren Sie sie im hiPSC-Medium.

Übertragen Sie die Zellen auf eine mit Biopolymer beschichtete Platte. Inkubieren, damit die MEFs haften können.

Übertragen Sie die suspendierten hiPS-Zellen auf eine Mikroplatte mit V-Boden. Zentrifugieren Sie die Zellen und inkubieren Sie sie, um die Bildung von Zellaggregaten zu induzieren.

Mit einem Differenzierungsmedium auffüllen. Die Nährstoffe des Mediums und die Zell-Zell-Wechselwirkung