Entwicklung und Pflege serumfreier Embryoidkörper

Beginnen Sie mit einer Vertiefung, die neurale Vorläuferzellen oder NPC-Aggregate zur Unterscheidung von Medien-1 oder DM-1 enthält.

Diese NPCs sind Vorläufer der neuronalen Abstammung, die aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen oder hiPSCs unter Verwendung von DM-1 unter kontrollierten Bedingungen erzeugt wurden.

Übertragen Sie die NPC-Aggregate auf einen Membraneinsatz, der sich in einer Vertiefung mit DM-1 befindet, und entfernen Sie überschüssiges Medium.

Ändern Sie das Medium auf DM-2 und inkubieren Sie.

DM-2 liefert Nährstoffe und Differenzierungsfaktoren, die die Reifung von NPCs zu verschiedenen neuronalen Zelltypen fördern.

Undifferenzierte NPCs verwandeln sich in Embryoidkörper, die als serumfreie Embryoidkörper oder SFEBs bekannt sind, da den Medien Serum fehlt. Diese EBs ähneln der Morphologie eines sich entwickelnden Gehirns.

Übertragen Sie den Einsatz in eine Vertiefung, die DM-3 enthält.

DM-3 enthält Wachstumsfaktoren, die für die Aufrechterhaltung und das Wachstum von SFEBs unerlässlich sind.

Inkubieren, bis die SFEBs die gewünschte Größe erreicht haben.

Bereiten Sie nach zweiwöchiger Kultivierung der Zellen Sechs-Well-Platten mit 40-Mikron-Zellkultureins