Differenzierung von künstlich hergestellten humanen induzierten pluripotenten Stammzellen in funktionelle Motoneuronen

Nehmen wir humane induzierte pluripotente Stammzellkolonien (iPSC), die auf einer mit extrazellulärer Matrix beschichteten Platte kultiviert wurden.

Die iPSCs sind genetisch so verändert, dass sie Transkriptionsfaktoren exprimieren, die die Differenzierung von Motoneuronen induzieren.

Entfernen Sie das Medium und fügen Sie Enzyme hinzu, um die Kolonien zu lösen.

Dissoziieren Sie die Zellen mechanisch in eine einzellige Suspension und sammeln Sie sie.

Zentrifugieren und den Überstand entfernen.

Resuspendieren Sie die Zellen in Medien, die einen Inhibitor enthalten, der die zelluläre Apoptose verhindert.

Die Zellen auf einer mit Matrix beschichteten Schale anrichten.

Fügen Sie frische Differenzierungsmedien hinzu, die das Antibiotikum Doxycyclin und niedermolekulare Inhibitoren enthalten.

Doxycyclin induziert die Expression von Transkriptionsfaktoren, während die Inhibitoren spezifische Signalwege blockieren und so die iPSC-Differenzierung in Motoneuronen-Vorläuferzellen fördern.

Fügen Sie Enzyme hinzu, um die Zellen abzulösen.

Sammeln Sie die Zellen und dissoziieren Sie sie mechanisch.

Zentrifugieren und den Überstand verwerfen. Resuspendieren Sie die Zellen in neuronalen Medien.

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