Gewebeimmunfärbung für die bildgebende Massenzytometrie
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:33 Min. • January 15th, 2026
Legen Sie einen Objektträger mit einer fixierten Gewebeprobe in einen Antigen-Retrieval-Puffer und erhitzen Sie ihn.
Die erhöhte Temperatur und der alkalische pH-Wert des Puffers brechen die fixierungsinduzierten Proteinvernetzungen auf und legen Antigen-Epitope frei.
Kühlen Sie den Objektträger ab, um hitzebedingte Gewebeschäden zu vermeiden, und spülen Sie ihn dann aus, um überschüssigen Puffer zu entfernen.
Tragen Sie eine hydrophobe Barriere auf und legen Sie den Objektträger in eine Feuchtigkeitskammer.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, der die Permeabilisierung blockiert. Das Detergens des Puffers permeabilisiert die Zellmembranen, und blockierende Proteine maskieren unspezifische Bindungsstellen, um die Hintergrundfärbung zu reduzieren.
Entfernen Sie überschüssigen Puffer, fügen Sie einen metallkonjugierten Antikörpercocktail hinzu und inkubieren Sie, um die Antikörperbindung an spezifische Antigene zu ermöglichen.
Waschen Sie den Objektträger und entfernen Sie ungebundene Antikörper.
Fügen Sie einen metallkonjugierten Kernfleck hinzu, der in die Zellen eindringt und an die DNA bindet.
Spülen Sie überschüssigen Fleck ab und trocknen Sie den Objektträger.
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