JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:44 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Stimulationspipette mit roten, kalziumunempfindlichen Fluorophoren in künstlicher Zerebrospinalflüssigkeit (ACSF).
Positionieren Sie die Pipette in der Nähe des Zielneurons in einer Hippocampus-Schnitte.
Platzieren Sie eine Patch-Pipette mit einer Aufzeichnungselektrode, die in einem Elektrolyten gebadet ist, der rote Calcium-unempfindliche und grüne Calcium-Indikator-Fluorophore enthält, in der Nähe des Ziels.
Üben Sie konstanten Überdruck aus, um die Gewebeoberfläche kurzzeitig zu stören und die Nähe zum Ziel anzuzeigen.
Wenn sich das Grübchen auf der neuronalen Membran bildet, lassen Sie den Druck ab, um eine Versiegelung zu bilden.
Üben Sie Unterdruck aus, um die Dichtung festzuziehen.
Stabilisieren Sie das Membranpotential bei einer konstanten negativen Spannung.
Fahren Sie mit Unterdruck fort, um die Membran zu brechen, damit sich die fluorophorhaltigen Elektrolyte im Neuron ausbreiten können.
Visualisieren Sie die rote Fluoreszenz der dendritischen Zielwirbelsäule und richten Sie die Stimulationspipette in der Nähe aus.
Wenden Sie elektrische Impulse an, um die Kalziumkanäle zu öffnen.
Verwenden Sie die Zwei-Photonen-Mikroskopie, um vorübergehende Änderungen
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