JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 3:25 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Aufzeichnungskammer, in der sich das penetrierende Mikroelektrodenarray (PMEA) befindet, das elektrische Signale aus dem Nervengewebe aufzeichnet.
Verbinden Sie den Einlass mit Flaschen mit sauerstoffhaltigem aCSF und oxygeniertem aCSF mit 4-Aminopyridin oder 4-AP über einen Dreiecksverbinder.
Befestigen Sie den Auslass an einer Vakuumröhre.
Die Rohrleitung zwischen Einlass und Muschel auf physiologische Temperatur erhitzen.
Übertragen Sie bei geschlossenem Ein- und Auslass den entfalteten Hippocampus in die Kammer.
Positionieren Sie unter einem Mikroskop den Hippocampus auf dem PMEA.
Entferne die Lösung aus der Kammer.
Platzieren Sie einen Gewebeanker, um das Gewebe an den PMEA-Elektroden zu halten.
Öffnen Sie den Ein- und Auslass, um den aCSF-Fluss zu starten.
Inkubieren Sie das Gewebe mit aCSF, um eine neuronale Akklimatisierung zu ermöglichen.
Fließen Sie dann aCSF mit 4-AP ein. Das 4-AP blockiert die neuronalen Kaliumkanäle und verlängert so die Dauer des Aktionspotentials.
Der PMEA erfasst die elektrischen Signale, die proportional zum verstärkten neuronalen Feuern von Hippocampus-Neuronen sind.
Bei diesem Verfahren wird eine Flasche mit normalem aCSF und eine weitere Flasche mit 4-AP aCSF gefüllt. Blasen Sie die Lösungen mit 95 % Sauerstoff und 5 % Kohlendioxid ab Beginn der Experimente. Verwenden Sie einen Dreiecksverbinder, um zu steuern, welche Lösung während eines Experiments ausgewählt wird.
Schließen Sie als Nächstes ein Vakuumrohr an den Auslass der Kammer an, um die Lösung in einen Staubbehälter zu entfernen. Erhitzen Sie die Rohrleitung, bevor Sie die Lösung in die Aufnahmekammer leiten, und halten Sie sie auf einer kontrollierten Temperatur von 35 Grad Celsius. Nachdem Sie den Ein- und Auslass der Aufnahmekammer geschlossen haben, verwenden Sie eine speziell angefertigte Glaspipettenpipette, um den entfalteten Hippocampus in die Aufnahmekammer zu übertragen.
Positionieren Sie unter dem Mikroskop den entfalteten Hippocampus mit der offensichtlichen Seite nach unten, dem CA3-Bereich nach unten und dem CA1-Feld in Richtung des Forschers. Saugen Sie die Lösung in der Kammer vorsichtig mit einer Vakuumpipette vom Rand der Aufnahmekammer ab, bis die Kammer getrocknet ist und das Gewebe auf dem Array liegt.
Platzieren Sie dann vorsichtig einen speziell angefertigten Gewebeanker auf dem Gewebe, um den entfalteten Hippocampus auf dem Array zu halten. Füllen Sie die Aufnahmekammer mit ein paar Tropfen Lösung. Öffnen Sie nach und nach den Einlass und Auslass, um die Durchflussmenge in der IV-Tropfkammer auf etwa zwei Tropfen pro Sekunde einzustellen.
Inkubieren Sie das Gewebe in der Aufnahmekammer mit normalem Liquor für etwa eine Minute. Schalten Sie dann die Lösungszufuhr auf 4-AP gelöstes aCSF um und stellen Sie die Durchflussrate richtig ein. Inkubieren Sie das Gewebe vor der Aufnahme etwa 5 bis 10 Minuten lang in gelöstem 4-AP-Liquor.