Aufzeichnung der neuronalen Aktivität in frei beweglichen Mäusen mittels Faserphotometrie

Beginnen Sie mit einer frei beweglichen Maus mit einer implantierten Glasfaserkanüle.

Verbinden Sie ein Ende eines Glasfaser-Patchkabels mit der Kanüle und das andere Ende mit einer Anregungslichtquelle.

Die Maus exprimiert einen grünen, mit Fluorophoren markierten genetisch kodierten Kalziumindikator (GECI) im lateralen hypothalamischen Bereich oder LHA-Neuronen.

Die implantierte optische Faser berührt die laterale Habenula oder LHb-Region, wo die LHA-Axone enden.

Stimulieren Sie den GECI bei seiner optimalen Anregungswellenlänge und zeichnen Sie das Basissignal auf.

Wenden Sie nun wiederholte Luftstöße auf die Maus an, um eine aversive Stressreaktion hervorzurufen.

Dieser Stimulus löst Aktionspotentiale in LHA-Axonterminalien aus, öffnet spannungsgesteuerte Kalziumkanäle und ermöglicht den Kalziumeinfluss.

Intrazelluläre Kalziumionen binden an den GECI und induzieren eine Konformationsänderung, die die grüne Fluoreszenzemission erhöht.

Visualisieren Sie das optische Signal.

Eine erhöhte Fluoreszenz als Reaktion auf Luftstöße in der Maus bestätigt die Rolle des LHA-LHb-Signalwegs bei der Übertragung aversiver Signale.

Beginnen Sie damit, das distale Ende der Fasern des Patchkabels mit dem Auge und mit einem Mini-Fasermikroskop zu inspizieren. Wenn die Oberfläche der Fasern zerkratzt ist, polieren Sie die Fasern mit einer Faserpolierfolie mit feiner Körnung nach. Reinigen Sie dann die distalen Enden des Patchkabels mit 70 % Ethanol und einem Applikator mit Wattestäbchen. Reinigen Sie die Glasfaserkanülen mit 70 % Ethanol und einem Applikator mit Wattestäbchen.

Verbinden Sie das Aderendhülsenende des Patchkabels mit einer Keramik-Spalthülse, die mit einem schwarzen Schrumpfschlauch bedeckt ist, mit der implantierten Faser. Achten Sie beim Anschließen darauf, dass die Hülse fest sitzt. Lassen Sie das Tier einige Minuten lang genesen, beginnen Sie dann mit der Aufzeichnung des optischen Signals und führen Sie das Experiment durch. Behalten Sie während der Aufnahme die Live-Spur sorgfältig im Auge, um qualitativ hochwertige Aufnahmen zu gewährleisten, und achten Sie auf Signalsprünge, die darauf hinweisen, dass die Hülle nicht fest genug ist.