JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:44 Min. • July 8th, 2025
Sichern Sie einen hippocampus-entorhinalen Kortexschnitt der Maus in einer untergetauchten Aufnahmekammer.
Fließen Sie kontinuierlich sauerstoffhaltiges ACSF bei konstanter Temperatur, um die Lebensfähigkeit des Gewebes zu erhalten.
Positionieren Sie eine mit einer Elektrolytlösung gefüllte Stimulationspipette im Stratum radiatum der hippokampalen CA3-Region, die Neuronen enthält, die Informationen aus dem entorhinalen Kortex erhalten.
Führen Sie eine ACSF-gefüllte Aufzeichnungspipette in das Stratum pyramidale der CA1-Region ein, das aus Neuronen besteht, die Synapsen mit axonalen Projektionen aus dem CA3 bilden.
Legen Sie mit der Stimulationspipette einen elektrischen Impuls an, um Aktionspotentiale in den präsynaptischen CA3-Neuronen auszulösen.
Das Aktionspotential induziert die Freisetzung von Neurotransmittern, die an Rezeptoren auf den postsynaptischen CA1-Neuronen binden. Die Bindung induziert den Ioneneinstrom, was zu einer Änderung des Membranpotentials führt.
Die kombinierten Veränderungen des Membranpotentials mehrerer postsynaptischer CA1-Neuronen, die als lokales Feldpotential oder LFP bezeichnet werden, werden extrazellulär von der Aufzeichnungspipette aufgezeichnet.
Um lokale Feldpotentiale zu erfassen, füllen Sie ein 400-Milliliter-Becherglas mit karbogenblasigem ACSF und stecken Sie ein Ende des Pumpenschlauchs in das Becherglas. Schalten Sie eine Schlauchpumpe mit acht bis 10 Millilitern pro Minute ein, um den ACSF aus dem 400-Milliliter-Becherglas in ein beheiztes Reservoir und vom Reservoir in die Aufnahmekammer bei 32 Grad Celsius zu leiten.
Klemmen Sie dann den Schlauch kurz fest und schalten Sie die Pumpe aus, um den Durchfluss zu unterbrechen. Übertragen Sie mit einer feinen Pinzette eine Gehirngewebescheibe in die Aufnahmekammer an der Ecke des Linsenpapiers, auf dem das Gewebe ruht, und schneiden Sie sie nach unten. Ziehen Sie das Linsenpapier ab, lassen Sie die Scheibe in der Aufnahmekammer versinken und befestigen Sie die Scheibe mit einer Harfe.
Führen Sie mit einem manuellen Mikromanipulator die Spitze einer mit Natriumchlorid gefüllten Stimulationspipette in einem Winkel von 30 bis 45 Grad langsam in die Oberfläche der Scheibe ein. Verwenden Sie dann einen zweiten Mikromanipulator, um die Spitze einer mit ACSF gefüllten Pipette mit lokalem Feldpotenzial in einem Winkel von 30 bis 45 Grad langsam in den interessierenden Bereich zu schieben, und zeichnen Sie das lokale Feldpotenzial der Probe gemäß Standardprotokollen auf.