JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:55 Min. • July 8th, 2025
Sichern Sie ein Maushirnschnitt in einer Aufnahmekammer, die nach längerer Inkubation mit sauerstoffhaltigem aCSF durchblutet wurde.
Die Zellen in der Scheibe sind mit einem Kalziumindikator beladen, der intrazelluläre Kalziummessungen erleichtert.
Nehmen Sie eine Aufzeichnungspipette, die aus einer Elektrode in einer Elektrolytlösung besteht.
Identifizieren Sie ein Zielneuron. Positionieren Sie die Aufzeichnungspipette mit positivem Druck auf der Zellmembran, so dass ein Grübchen entsteht.
Üben Sie Unterdruck aus, um eine dichte Abdichtung zu erzeugen.
Wenden Sie weiterhin Unterdruckimpulse an, die die Membran aufbrechen und eine Ganzzellenkonfiguration herstellen.
Perfundieren Sie aCSF mit einer hohen Kaliumkonzentration, die die Membran des Neurons depolarisiert.
Die Depolarisation öffnet Natriumkanäle und löst ein Aktionspotential aus, das wiederum spannungsgesteuerte Kalziumkanäle aktiviert und den Kalziumeinstrom ermöglicht.
Kalziumionen binden an den Indikator und verstärken die Fluoreszenz, die bei geeigneter Beleuchtung sichtbar gemacht werden kann.
Die Zunahme der intrazellulären Fluoreszenz, die durch den Kalziumeinstrom nach Kaliumapplikation verursacht wird, deutet auf
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