Elektrophysiologische Aufzeichnung von zuvorkommenden Nervus des Dickdarms in einem ex vivo Dickdarm der Ratte

Beginnen Sie mit einem elektrophysiologischen Aufbau, der ein immobilisiertes Dickdarmsegment der Maus in einer ausgewogenen Elektrolytlösung enthält.

Der Dickdarm hat ein freiliegendes großes Beckenganglion mit einem vorpräsezierten darmafferenten sensorischen Nervenast, der Signale vom Dickdarm an das Gehirn weiterleitet.

Der Dickdarm wird an beiden Enden mit Dreiwegeventilen für die Kochsalzinfusion kanüliert.

Füllen Sie die Aufzeichnungselektrode und positionieren Sie sie in der Nähe des afferenten Nervs.

Wenden Sie einen leichten Sog an, um den Nerv in die Elektrode zu ziehen und eine dichte Abdichtung zu bilden.

Überwachen Sie das elektrische Signal des Grundnervs und den Innendruck des Dickdarms.

Schließen Sie den Hahn an der Auslasskanüle, während Sie die Kochsalzlösung kontinuierlich in den Dickdarm infundieren.

Dies führt zu einem allmählichen Anstieg des Drucks im Dickdarm, was zu einer Dehnung des Dickdarms führt und den afferenten Nerv stimuliert.

Zeichnen Sie das Nervensignal und den Dickdarmdruck erneut auf.

Ein allmählicher Anstieg des Nervensignals mit erhöhtem Druck bestätigt die afferente Nervenstimulation.

Untersuchen Sie eine vorgezogene Glaspipette unter dem Präpariermikroskop. Brechen Sie die Spitze der Elektrode mit einer Pinzette auf, so dass sie eine Größe hat, die mit dem Durchmesser des aufzunehmenden Nervs kompatibel ist. Lehnen Sie danach die Spitze ab, indem Sie sie in der Nähe eines helleren Flares platzieren.

Personen, die

mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, können es auch schwierig finden, die Spitze der Elektrode so abzuschrägen, dass sie mit der Größe des Nervs kompatibel ist.

Setzen Sie anschließend die abgeschrägte Elektrode in den Elektrodenhalter ein. Schließen Sie dann eine 10-Milliliter-Spritze an den seitlichen Anschluss des Halters an, um Unter- oder Überdruck auf die Elektrode auszuüben. Verbinden Sie danach den Halter mit dem Kopftisch des Bioverstärkers und montieren Sie den Kopftisch auf einen Manipulator.

Bewegen Sie anschließend die Elektrode in das Gewebebad und füllen Sie die Elektrode durch sanftes Saugen mit der Krebslösung, bis sie den Silberdraht des Halters berührt. Platzieren Sie dann die Elektrodenspitze in der Nähe des abgeschnittenen Endes des Nervs und üben Sie Unterdruck aus, um den Nerv in die Elektrode zu saugen. Üben Sie dann mehr Unterdruck aus, so dass etwa 1 Millimeter des Nervs in die Elektrode gezogen wird und einen dichten Verschluss bildet.

Schalten Sie nun den Bioverstärker ein und stellen Sie den Filter auf 300 bis 3.000 Hertz ein. Überwachen Sie das Signal auf dem Oszilloskop und zeichnen Sie das Nervensignal und das intraluminale Drucksignal in der Verarbeitungssoftware Spike Data auf. Als nächstes wenden Sie eine Rampendehnung des Dickdarms an, indem Sie den Drei-Wege-Hahn an der Auslasskanüle schließen, während Sie kontinuierlich intraluminal infundieren. Überwachen Sie den intraluminalen Druck, bis er 60 Millimeter Quecksilbersäule erreicht.