JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:34 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie einen koronalen Schnitt des chemosensorischen Vomeronasalorgans von einer transgenen Maus, die fluoreszenzmarkierte sensorische Neuronen exprimiert.
Das sensorische Epithel enthält diese markierten Neuronen, die dem mit der Nasenhöhle verbundenen Lumen ausgesetzt sind, um chemische Signale wahrzunehmen.
Sichern Sie die Scheibe mit einem Scheibenanker in einer Bildgebungskammer.
Übertragen Sie die Kammer in ein Aufnahme-Setup und lassen Sie sauerstoffhaltige extrazelluläre Lösung fließen, um die Lebensfähigkeit des Gewebes zu erhalten.
Positionieren Sie eine Perfusionspipette in der Nähe der Schnitte, um chemische Reize einzuführen, und eine Aufnahmepipette über den sensorischen Neuronen.
Identifizieren Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop die markierten Neuronen.
Üben Sie positiven Druck aus, um ein Verstopfen der Pipette zu verhindern, und nähern Sie sich einem Neuron, bis sich ein Grübchen auf der Membran bildet.
Schalten Sie auf Unterdruck um und ziehen Sie die Membran in die Pipette.
Wenden Sie einen Sog an, um die Membran zu durchbrechen, und stellen Sie eine Kontinuität mit dem Zytoplasma her, die als Ganzzell-Patch-Klemme bezeichnet wird und die Einführung chemische
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