Implantation einer Elektrodenanordnung in ein Mäusegehirn zur elektrophysiologischen Aufzeichnung

Befestigen Sie eine betäubte Maus auf einem stereotaktischen Rahmen, der ein Heizkissen enthält, um die Körpertemperatur zu halten.

Tragen Sie Gleitmittel auf, um ein Austrocknen der Augen zu verhindern, und injizieren Sie eine Elektrolytlösung subkutan, um die Hydratation aufrechtzuerhalten.

Entfernen Sie das Fell von der Kopfhaut, desinfizieren Sie den Bereich und injizieren Sie subkutan ein Schmerzmittel, um die Schmerzen zu lindern.

Machen Sie einen Schnitt, um den Schädel freizulegen, und reinigen Sie ihn dann, um anatomische Orientierungspunkte zur Identifizierung von Gehirnregionen sichtbar zu machen.

Tragen Sie Zahnkleber auf und härten Sie ihn mit einer Polymerisationslampe aus, um die Elektrodenimplantation zu unterstützen.

Bohren Sie Löcher über dem Hippocampus und dem Kleinhirn und montieren Sie eine Elektrodeneinheit mit Hilfe einer Halterung am stereotaktischen Rahmen.

Die bipolaren Elektroden zeichnen die Aktivität des Hippocampus auf, während eine Referenzelektrode die Basisaktivität aus dem Kleinhirn bezieht.

Setzen Sie die Elektroden ein, befestigen Sie die Baugruppe mit Zahnzement und lösen Sie sie von der Halterung.

Verabreichen Sie erneut die Elektrolytlösung und ein Analgetikum.

Lassen Sie die Maus vollständig genesen, bevor Sie eine elektrophysiologische Aufzeichnung durchführen.

Bevor Sie mit der Operation fortfahren, notieren Sie das Gewicht der 8 Wochen alten VGAT-Cre-Mäuse. Setzen Sie das Tier dann in eine Induktionskammer, um eine Anästhesie einzuleiten. Legen Sie die betäubte Maus auf ein Heizkissen bei 37 Grad Celsius. Wenn Sie ein rückkopplungsgesteuertes Temperatursystem verwenden, führen Sie den Temperaturfühler zur Temperaturüberwachung während der Operation in das Rektum des Tieres ein. Um die Operation zu starten, leiten Sie den Inhalationsanästhesiefluss auf den Nasenkonus um und setzen Sie das Tier in den stereotaktischen Rahmen, indem Sie die vorderen oberen Zähne vorsichtig in den Schneidezahn setzen und den Kegel auf die Nase bewegen, dann die Ohrstangen in die Ohren stecken und am stereotaktischen Rahmen befestigen.

Stellen Sie sicher, dass der Kopf des Tieres nivelliert und zentriert ist und nicht bewegt werden kann, wenn er leicht abgetastet wird. Sobald das Tier aufsitzt, injizieren Sie 0,5 Milliliter Normosol auf die Mäuse zur Flüssigkeitszufuhr und tragen Sie Augengleitmittel auf, um ein Austrocknen der Hornhaut zu verhindern. Überwachen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie eine Zehe der hinteren Gliedmaßen einklemmen. Wenn der Entzugsreflex beim Tier nicht vorhanden ist, entfernen Sie die Kopfhaare der Maus um den Operationsbereich herum. Wenn Sie fertig sind, desinfizieren Sie die saubere Hautpartie dreimal mit einer abwechselnden Anwendung von Ethanol und Jod, abschließend mit Jod, und injizieren Sie 0,05 Milliliter 0,25% Bupivacain subkutan.

Machen Sie mit einem Skalpell einen Schnitt am Schädel und schneiden Sie dann mit einer chirurgischen Schere einen Teil der Haut heraus, um den Schädel freizulegen. Schieben Sie die Haut zur Seite, bevor Sie den Schädel mit einem Wattestäbchen von allen darunter liegenden Geweben reinigen. Reinigen Sie den Schädel mit sterilen Wattestäbchen mit Wasserstoffperoxid und machen Sie die Schädelnähte, Bregma und Lambda sichtbar. Bewegen Sie mit dem stereotaktisch montierten Bohrer die Bohrspitze auf die Bregma- und Null-Koordinaten x, y und z, heben Sie den Bohrer an und bewegen Sie ihn auf Lambda, um seine Koordinaten zu bestimmen und zu bestimmen, ob der Kopf waagerecht ist.

Nachdem Sie den Schädel gründlich getrocknet haben, tragen Sie mit dem Applikator einen Tropfen selbstätzenden Zahnkleber auf. Warten Sie 60 Sekunden, bevor Sie den Zahnkleber 40 Sekunden lang mit einem dentalen UV-Licht aushärten. Eine glänzende Oberfläche zeigt an, dass der Klebstoff effektiv mit dem Schädel vernetzt wurde. Bohren Sie mit Hilfe eines 0,031-Zoll-Bohrers vorsichtig zwei Bohrlöcher beidseitig mit 5.000 Umdrehungen pro Minute oder U/min in den Schädel, um ein Bohren in das Gehirn zu vermeiden. Tragen Sie einen Tropfen Kochsalzlösung auf, um das Bohren der Gratlöcher zu verbessern. Für die Implantation von Tiefenelektroden des Hippocampus bohren Sie 3 Millimeter posterior und 3 Millimeter lateral vom Bregma.

Bohren Sie ein Bohrloch für die Referenzelektrode oberhalb des Kleinhirns, hinter dem Lambda 6 Millimeter posterior und 0 Millimeter lateral vom Bregma. Montieren Sie anschließend den sechspoligen Sockel mit montierten Elektroden in den Elektrodenhalter auf einem stereotaktischen Rahmen. Indem Sie die Elektroden über den entsprechenden Gratlöchern ausrichten, senken Sie das Headset langsam ab und navigieren Sie, um die beiden bipolaren Elektrodenspitzen direkt über dem linken und rechten Hippocampus-Gratloch zu platzieren, und stellen Sie bei Bedarf die Referenzelektrode so ein, dass sie über dem Loch über dem Kleinhirn schwebt.

Wenn sich die Hippocampus-Drehelektroden direkt über den Löchern befinden, setzen Sie die z-Achse auf Null und senken Sie die Elektrode langsam auf minus drei Millimeter in den rechten und linken Hippocampus ab und führen Sie die Referenzelektrode in das Loch über dem Kleinhirn. Bereiten Sie den Zahnzement vor, indem Sie das Pulver und die Flüssigkeit in einer Rührschüssel mischen, und bedecken Sie dann die Schädeloberfläche, die Elektroden und den Raum zwischen der Schädeloberfläche und der Unterseite des Sockels mit Zahnzement.

Sobald der Zement getrocknet und ausgehärtet ist, lösen Sie den Elektrodenhalter vom stereotaktischen Arm, heben Sie den Arm an und entfernen Sie den Halter vom Sockel. Nachdem Sie der Maus subkutan Ketoprofen und Normosol verabreicht haben, nehmen Sie das Tier aus dem stereotaktischen Rahmen, um das Tier auf das beheizte Pad im Vivariumkäfig zu bringen. Sobald Sie vollständig wach sind, bringen Sie das einzelne Tier in den Vivariumkäfig zurück, füttern Sie das Tier mit weichem Futter und überwachen Sie den Gewichtsverlust täglich bis zu 72 Stunden nach der Operation.