JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 7:22 Min. • July 8th, 2025
Man nehme Segmente einer hinteren Hirnarterie der Maus.
Inkubieren Sie mit einer Enzymlösung, um die Gewebematrix abzubauen und die Zellen zu lockern.
Ersetzen Sie die Lösung durch einen Puffer und übertragen Sie dann ein Segment in eine Aufnahmekammer.
Dissoziieren Sie mechanisch die Zellschichten des Bindegewebes und der glatten Muskulatur und isolieren Sie die darunter liegende Endothelröhre.
Sichern Sie den Schlauch, entfernen Sie die dissoziierten Schichten und fügen Sie einen physiologischen Puffer hinzu.
Platzieren Sie die Kammer in einem Aufzeichnungssystem mit kontinuierlichem Pufferfluss.
Führen Sie einen fluoreszierenden Kalziumindikator ein, der in die Endothelzellen eindringt, und führen Sie dann eine Aufzeichnungselektrode in eine Zelle ein.
Verabreichen Sie ein Medikament, das den Einstrom von Kalziumionen auslöst und die nachgeschaltete Signalübertragung für die Kalziumfreisetzung aus dem endoplasmatischen Retikulum induziert.
Der Indikator bindet an das Kalzium und emittiert bei Anregung Fluoreszenz.
Die Kalziumerhöhung aktiviert kalziumabhängige Kaliumkanäle, was zu einem Kaliumabfluss führt und das Membranpotential verändert.
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