Elektrophysiologische Aufzeichnungen von Drosophila sensilla als Reaktion auf flüchtige Geruchsstoffe

Montieren Sie eine lebende Drosophila-Fliege in einer Röhre mit freiliegendem Kopf, Antennen auf Klebeband und gesichert durch eine Haltestange.

Halten Sie das Präparat unter einem konstanten Strom von befeuchteter Luft, um ein Austrocknen zu verhindern.

Führen Sie die Referenzelektrode durch den Clypeus, eine Stützstruktur, die die Mundwerkzeuge schützt, ein, um das Kreislaufsystem zu erreichen.

Platzieren Sie die Aufzeichnungselektrode in der Nähe des Sensillums, dem Sinnesorgan des Insekts.

Führen Sie die Elektrode in die Basis des Sensillums ein.

Zeichnen Sie Signale mit spezifischen Spikes auf, um die korrekte Elektrodenpositionierung in der Nähe der Geruchsrezeptor-Neuronen zu bestätigen.

Schließen Sie eine Kartusche mit dem Prüfodormittel an das Verabreichungsröhrchen an.

Positionieren Sie den Schlauch auf die Antenne der Fliege und stellen Sie die Höhe und den Abstand zu den Elektroden ein.

Stellen Sie mit der Software den Geruchsdurchfluss und die Dosiermenge ein und geben Sie dann das Odormittel frei.

Zeichnen Sie nun elektrische Signale auf, um die neuronale Reaktion der Fliege auf den Geruchsstoff zu erfassen.

Um Aufnahmen zu machen, führen Sie die Referenzelektrode mit einer schnellen und gleichmäßigen Bewegung in den Clypeus ein. Platzieren Sie es direkt unter der Nagelhaut, wo es mit der Hämolymphe in Kontakt kommt. Senken Sie dann die Aufzeichnungselektrode langsam ab, bis sie in die gleiche Sichtebene wie das Zielsensillum eintritt. Führen Sie dann die Aufzeichnungselektrode in die Sensillarbasis ein.

Bevor Sie fortfahren, stellen Sie sicher, dass ein hohes Signal-Rausch-Verhältnis mit identifizierbaren Spitzen von at4A- und at4C-Neuronen vorhanden ist. Das at4A-Neuron sollte nicht schneller als 20 Hertz feuern.

Verbinden Sie nun die Kartusche mit dem Odormittelabgaberohr. In diesem Fall wird eine Palmitoleinsäure-Kartusche angebracht. Verwenden Sie als Nächstes den Mikromanipulator, um die Patrone in Richtung Vorbereitung zu manövrieren, während Sie sie auf den Kopf richten. Positionieren Sie die Tonabnehmerspitze aus einem Abstand von etwa 4 Millimetern direkt auf die Antenne. Die Kartusche muss sich außerdem etwa 1 Millimeter über dem Schlitten befinden.

Die Patrone kann von den Elektroden und dem Objektträger eng begrenzt sein. Er sollte idealerweise mindestens vier Millimeter von beiden Elektroden entfernt sein. Stellen Sie zur Stimulation den Odormitteldurchflussregler auf 500-Millisekunden-Stöße ein und verwenden Sie eine Durchflussrate von 500 Millilitern pro Minute. Zeichnen Sie für jeden Stimulus-Burst die elektrische Aktivität 10 Sekunden lang auf.