Detektion physiologischer Reaktionen von sensorischen Neuronen in Drosophila

Befestigen Sie einen betäubten genetisch veränderten Drosophila melanogaster auf der Seite an einem Deckglas.

Strecken Sie die Vorderbeine aus und sichern Sie sie, um die Fußwurzelsegmente freizulegen.

Diese Segmente haben gustatorische Neuronen, die Kalziumindikatorkomplexe exprimieren, die in kalziumgebundener Form fluoreszieren.

Ziehe eine hydrophobe Barriere um die Fliege, um die Lösung zurückzuhalten.

Lassen Sie die Fliege sich erholen und legen Sie eine gepufferte Kochsalzlösung auf die freiliegenden Fußwurzelsegmente, um sie zu befeuchten.

Beobachten Sie unter einem konfokalen Mikroskop Tarsalsegmente und bilden Sie die gustatorischen Neuronen in verschiedenen Tiefen ab, um eine Fluoreszenz vor der Stimulation zu erhalten.

Geben Sie eine Stimulationslösung, die lipophile Liganden enthält, auf das Segment.

Diese Liganden binden an die gustatorischen Neuronenrezeptoren, initiieren Signalwege und lösen die Öffnung von Kalziumkanälen aus.

Dadurch können Kalziumionen aus der extrazellulären Flüssigkeit in das Zytoplasma eindringen und an die Kalziumindikatorkomplexe binden, was zu einer Fluoreszenzemission führt.

Bei erneuter Beobachtung bestätigt eine Zunahme der neuronalen Fluo