JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:43 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit Drosophila-Larven, bei denen freiliegende Muskel- und Nervenfasern in eine Lösung getaucht werden, die Vesikel aus fluoreszierendem Membranfarbstoff oder FM-Farbstoff enthält.
Der FM-Farbstoff bindet an die Lipide in der Zellmembran und bildet eine fluoreszierende Beschichtung darüber.
Positionieren Sie die Saugmikroelektrodenspitze mit einem Mikromanipulator unter einem Mikroskop.
Konzentrieren Sie sich auf die Nervenfasern und die Mikroelektrode.
Saugen Sie mit Unterdruck eine Schlaufe der Nervenfaser in die Mikroelektrode.
Wenden Sie Stromimpulse an, um die Nervenfaser zu stimulieren.
Dies löst die neuromuskuläre Verbindung, an der sich ein Motoneuron mit einer Muskelfaser verbindet, aus, um die synaptische Vesikelendozytose einzuleiten.
Während dieses Prozesses umhüllt die Zelle die mit FM-Farbstoff beschichtete Membran, um gefärbte endozytäre Vesikel zu bilden, die sich ideal für die Visualisierung präsynaptischer Stadien der Neurotransmission eignen.
Waschen Sie den FM-Farbstoff ab und ersetzen Sie die externe Lösung.
Legen Sie Stromimpulse an, um die mit FM-Farbstoffen gefärbten Vesikel aus der Zelle zu entladen.
Bereiten Sie für die elektrische Stimulation
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