JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:42 Min. • July 8th, 2025
Geben Sie ein lebendes neuromuskuläres Präparat aus Drosophila-Larven in eine Aufzeichnungskammer, die kalziumfreie Kochsalzlösung enthält.
Die Neuronen der Larve exprimieren einen lichtempfindlichen Kationenkanal.
Wechseln Sie zu einer mit Kalzium versetzten Kochsalzlösung, die einen Fluoreszenzfarbstoff enthält.
Der Farbstoff fluoresziert schwach im nicht-internalisierten Zustand, aber stark, wenn er von den Neuronen internalisiert wird.
Beleuchten Sie die Larve mit blauem Licht.
Dies aktiviert den Kanal, induziert einen Kationeneinstrom und eine Neuronendepolarisation und initiiert ein Aktionspotential.
Das Aktionspotential erreicht das synaptische Terminal an der neuromuskulären Verbindung, was den Kalziumeinstrom und die Vesikelexozytose ermöglicht.
Anschließend wird die farbstoffgebundene Membran während des Vesikelrecyclings internalisiert.
Mit kalziumfreier Kochsalzlösung waschen, um das Recycling von Vesikeln zu stoppen und nicht internalisierte Farbstoffe zu entfernen.
Visualisieren Sie das Fluoreszenzsignal.
Geben Sie dann farbstofffreie, mit Kalzium versetzte Kochsalzlösung hinzu und beleuchten Sie sie erneut.
Dies induziert ein weiteres Aktionspotential, den Kalziumein
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