JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:54 Min. • July 8th, 2025
Legen Sie ein Deckglas mit embryonalen Nierenzellen, die lichtabhängige Ionenkanäle exprimieren, und ein fluoreszierendes Reporterprotein auf eine mit Silikon aufgetragene Messkammer. Schließen Sie ihn und fügen Sie einen externen Puffer hinzu.
Positionieren Sie diese Kammer unter einem Mikroskop. Lege eine mit Agar gefüllte Badeelektrode auf. Perfusion mit einem Puffer, um Medienreste und abgestorbene Zellen zu entfernen.
Identifizieren Sie mit einem Fluoreszenzfilter die Zielzelle und fokussieren Sie sie.
Befestigen Sie eine Patch-Pipette an einem Mikromanipulator. Üben Sie Druck aus, um ein Verstopfen zu verhindern, und nähern Sie sich der Zelle.
Positionieren Sie die Pipette in der Nähe der Zelle und lassen Sie den Überdruck ab, um an der Spitze ein Membranpflaster zu bilden.
Üben Sie nach dem Formen des Membranpflasters Unterdruck aus, um die Membran zu brechen.
Wenden Sie ein Licht einer bestimmten Wellenlänge an, um die Ionenkanäle zu öffnen. Die Bewegung der Ionen wird als Spannungsänderung durch die Elektrode aufgezeichnet.
Versiegeln Sie zunächst die Messkammer mit Silikon, um ein Auslaufen des externen Puffers zu verhindern. Legen Sie dann ein Deckglas in die Kammer und
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