Perforierte Patch-Clamp-Aufnahmen von sensorischen Neuronenzellkörpern des Innenohrs

Platzieren Sie eine Kultur von sensorischen Neuronenzellkörpern des Innenohrs in einer Aufnahmekammer.

Füllen Sie eine Patch-Clamp-Pipette mit einer internen Lösung.

Verfüllung mit der gleichen Lösung, die ein membranperforierendes Antibiotikum enthält, so dass es allmählich bis zur Spitze gelangt.

Füllen Sie die Pipette zu zwei Dritteln mit der Antibiotikalösung, setzen Sie sie in eine Halterung mit einer Aufzeichnungselektrode ein und senken Sie sie in die Kammer ab.

Visualisieren Sie unter einem Mikroskop, um sich einem Neuron zu nähern.

Wenn die Pipettenspitze das Neuron berührt, bildet die neuronale Oberfläche ein Grübchen und der Widerstand nimmt zu.

Üben Sie Unterdruck aus, um eine dichte Abdichtung zwischen der Pipette und der Membran zu bilden.

Halten Sie das Haltepotenzial nahe am Ruhemembranpotential.

Das Antibiotikum perforiert die Membran und ermöglicht so die Bewegung der Ionen zwischen der Zelle und der Elektrode, um eine stabile ionische Umgebung zu schaffen.

Wenden Sie Spannungsstufen an, um spannungsgesteuerte Ionenkanäle zu öffnen, die einen Ioneneinstrom ermöglichen und Ströme erzeugen, die proportional zur Ionenkanalfunktion sind und von der Elektrode aufgezeic