Evaluierung von Bandsynapsen in bestimmten Frequenzbereichen der Maus-Cochlea

Beginnen Sie mit Röhrchen mit vorbehandelten Cochlea-Windungen der Maus mit einem permeabilisierenden Mittel und einem Blockierungsmittel, die unspezifische Wechselwirkungen verhindern.

Jede Umdrehung erkennt unterschiedliche Schallfrequenzen und enthält Haarzellen, die Schall in elektrische Signale umwandeln. Diese Signale werden über Neurotransmitter in Bandsynapsen an den Hörnerv weitergeleitet.

Entfernen Sie die Lösung und fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die mit Proteinen in Haar- und Nervenzellen an den Bandsynapsen interagieren, und waschen Sie sie dann.

Inkubieren Sie mit Sekundärantikörpern, die mit roten und grünen Fluorophoren markiert sind, die an ihre Primärantikörper binden.

Waschen, um ungebundene Sekundärantikörper zu entfernen.

Legen Sie die Probe auf einen Objektträger mit einem Einbettmedium, das Kernfarbstoff enthält, um die Kerne blau zu färben.

Montieren Sie das Deckglas. Trocknen Sie es und verwenden Sie dann ein konfokales Mikroskop, um jedes Segment in verschiedenen Tiefen abzubilden.

Bandsynapsen erscheinen als eng beieinander liegende rote und grüne Punktu.

Zählen Sie diese funktionellen Punkte in jeder Umdrehung, um ihre Reaktion auf die Schallfrequen