Proteinextraktion aus neuronalen Zellen

Nehmen Sie eine Zellkultur mit neuronalen Krebszellen, die an einem Deckglas befestigt sind, und halten Sie sie unter kalten Bedingungen.

Entfernen Sie das Kulturmedium und waschen Sie die Zellen wiederholt mit kaltem Phosphatpuffer, um das restliche Medium zu entfernen.

Fügen Sie einen Lysepuffer hinzu, der eine geringe Konzentration an nichtionischen Detergenzien und Proteaseinhibitoren enthält.

Das nichtionische Detergens bricht die Zellmembran auf, um die Lyse einzuleiten.

Währenddessen blockieren die Proteaseinhibitoren die zellulären proteolytischen Enzyme und schützen so die Proteine vor enzymatischem Abbau.

Verwenden Sie anschließend einen Zellschaber, um die teilweise lysierten Zellen vom Deckglas zu lösen.

Übertragen Sie den Inhalt in ein Röhrchen mit dem Lysepuffer.

Verwenden Sie unter kalten Bedingungen einen Homogenisator, um die Zellen mechanisch zu lysieren, um eine vollständige Zelllyse und Proteinfreisetzung zu gewährleisten.

Zentrifugieren Sie das Zelllysat.

Sammle den Überstand in ein frisches Röhrchen.

Die extrahierten Proteine aus den neuronalen Tumorzellen stehen nun für die weitere Analyse bereit.

Zur Validierung der Proteinexpression stellen Sie die Kultursc