Proteinextraktion aus neuronalen Zellen

0 Ansichten1:58 Min. • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nehmen Sie eine Zellkultur mit neuronalen Krebszellen, die an einem Deckglas befestigt sind, und halten Sie sie unter kalten Bedingungen.

Entfernen Sie das Kulturmedium und waschen Sie die Zellen wiederholt mit kaltem Phosphatpuffer, um das restliche Medium zu entfernen.

Fügen Sie einen Lysepuffer hinzu, der eine geringe Konzentration an nichtionischen Detergenzien und Proteaseinhibitoren enthält.

Das nichtionische Detergens bricht die Zellmembran auf, um die Lyse einzuleiten.

Währenddessen blockieren die Proteaseinhibitoren die zellulären proteolytischen Enzyme und schützen so die Proteine vor enzymatischem Abbau.

Verwenden Sie anschließend einen Zellschaber, um die teilweise lysierten Zellen vom Deckglas zu lösen.

Übertragen Sie den Inhalt in ein Röhrchen mit dem Lysepuffer.

Verwenden Sie unter kalten Bedingungen einen Homogenisator, um die Zellen mechanisch zu lysieren, um eine vollständige Zelllyse und Proteinfreisetzung zu gewährleisten.

Zentrifugieren Sie das Zelllysat.

Sammle den Überstand in ein frisches Röhrchen.

Die extrahierten Proteine aus den neuronalen Tumorzellen stehen nun für die weitere Analyse bereit.

Zur Validierung der Proteinexpression stellen Sie die Kulturschalen 48 Stunden nach der Transfektion auf Eis und waschen Sie die Zellen zweimal mit PBS. Behandeln Sie die Zellen in jeder Schale mit 200 bis 400 Mikrolitern Lysepuffer und verwenden Sie einen Zellschaber, um die Zellen von den Deckgläsern zu entfernen.

Übertragen Sie die von jeder Platte abgelösten Zellen in einzelne Mikrozentrifugenröhrchen und dissoziieren Sie die Zellen mit einem Homogenisator unter Eis weiter. Nach einer Minute pelletieren Sie die homogenisierten Zellstücke durch Zentrifugation.

10:37

Kombinierte Nukleotid- und Protein Extraktionen in Caenorhabditis elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

12:07

Extraktion und Reinigung von FAHD1-Protein aus Schweineniere und Mausleber

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:58

Neuronale Kerne Isolation von Human Postmortem Gehirngewebe

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:51

Isolierung und Kultivierung von embryonalen Ratten-Nervenzellen: ein Quick-Protokoll

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

12:38

Laser Capture Mikrodissektion von Neuronen aus Differenzierte Menschen Neuroprogenitor Zellen in Kultur

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:29

Simulation von Bauchspeicheldrüsenneuroplastizität: In-vitro- Zwei-Neuron-Plastizität Assay

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:51

Konsens Brain-derived Protein, Extraktionsprotokoll für das Studium der Human-und Maus-Gehirn-Proteome Mit Sowohl 2D-DIGE-und Mini-2DE Immunoblotting

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

07:49

Wirbelsäule Neuronen Isolierung und Kultur aus neonatalen Mäusen

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

11:39

Identifizieren von Zelloberflächenmarkern von primären neuralen Stamm- und Vorläuferzellen durch metabolische Kennzeichnung von Sialoglycan

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

07:39

Zelltypspezifische Proteinreinigung und Identifizierung aus komplexen Geweben unter Verwendung einer mutierten Methionin-tRNA-Synthetase-Mauslinie

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026