Fluoreszenz-Immunfärbung von Hippocampus-Neuronen der Ratte in einem mikrofluidischen Chip

Nehmen Sie einen mikrofluidischen Chip, der Hippocampus-Neuronen von Ratten enthält.

Der Chip verfügt über somatische und axonale Reservoire, deren Kompartimente durch Mikrorillen unterteilt sind, wodurch die Neuronen effektiv unterteilt und die somatischen und axonalen Regionen isoliert werden.

Entfernen Sie das Medium und fügen Sie Formaldehyd hinzu. Inkubieren, um die Neuronen zu fixieren und ihre Struktur zu erhalten.

Überschüssiges Formaldehyd entfernen und mit Puffer waschen. Fügen Sie dann ein Reinigungsmittel hinzu, um die Neuronen zu permeabilisieren.

Ersetzen Sie das Reinigungsmittel durch eine Blocklösung, um unspezifische Bindungsstellen zu blockieren.

Entfernen Sie die Blockierungslösung und inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die an spezifische neuronale synaptische Marker binden, bei denen es sich um integrale Membranproteine auf synaptischen Vesikeln handelt.

Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper und waschen Sie sie mit Puffer.

Inkubieren Sie mit Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern, die an die primären Antikörper binden, die auf synaptische Marker abzielen.

Ungebundene Sekundärantikörper entfernen und mit Puffer waschen.

Nehmen Sie den Chip unter eine