JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:45 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie die primären kortikalen Neuronen der Ratte in einer polymerbeschichteten Schale mit Glasboden.
Fixieren Sie die Neuronen mit Paraformaldehyd, um die Zellstrukturen zu erhalten.
Waschen Sie das überschüssige Paraformaldehyd ab.
Fügen Sie ein nichtionisches Detergens hinzu, um die Zellen zu permeabilisieren.
Behandeln Sie die Zellen mit einem grün fluoreszierenden Farbstoff, der auf das Strukturprotein filamentöses Aktin oder F-Aktin abzielt.
Entfernen Sie den überschüssigen Fleck.
Tragen Sie ein Blockierungsmittel auf, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf dendritische Proteine abzielen.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper.
Fügen Sie rote Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper hinzu, um an die Primärantikörper zu binden. Waschen Sie die überschüssigen Antikörper ab.
Tragen Sie einen Fluoreszenzfarbstoff auf, um die Zellkerne zu färben. Entfernen Sie den ungebundenen Farbstoff.
Fügen Sie ein Antifading-Reagenz hinzu, um Fluorophor-Photobleiche zu verhindern.
Nehmen Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie Bilder der Neuronen auf.
Identifizieren Sie eine F-Aktin-reiche Region innerhalb des markierten
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