Isolierung von Amyloid-Fibrillen aus Hirngewebeextrakt
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:38 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie einen Extrakt aus Hirngewebe der Maus, der Nicht-Amyloid-Proteine und Amyloidfibrillen, ein unlösliches Proteinaggregat, enthält.
Feste Saccharose hinzufügen und mischen, wobei die Dichte der Lösung erhöht wird.
Übertragen Sie es und zentrifugieren Sie, um dichtere Proteine von Ablagerungen zu trennen.
Den Überstand verwerfen, das Pellet in einem Puffer mit höherer Saccharosekonzentration resuspendieren, mischen und zentrifugieren.
Sammeln Sie die oberste Schicht mit einigen Amyloidfibrillen in einer frischen Tube, fügen Sie einen Waschpuffer hinzu und mischen Sie.
Entsorgen Sie nun die mittlere Schicht und übertragen Sie das mit Amyloidfibrillen angereicherte Pellet in das Röhrchen mit der obersten Schichtfraktion, um eine maximale Isolierung zu gewährleisten.
Die kombinierten Fraktionen werden zentrifugiert und der Überstand verworfen. Fügen Sie einen Verdauungspuffer hinzu und inkubieren Sie, um ausschließlich Nicht-Amyloid-Proteine abzubauen.
Zentrifugieren und den Überstand entfernen. Waschen Sie das Pellet, um verdaute Proteinreste zu entfernen.
Resuspendieren Sie das Pellet in einem Solubilisierungspuffer auf Saccharosebasis, der ein Detergens enthält, das die ver
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