Eine intrazerebroventrikuläre Injektion zur Analyse der Verteilung des murinen Cytomegalievirus in einem neonatalen Mausgehirn

Nehmen Sie eine Suspension des murinen Cytomegalievirus, das gentechnisch so verändert wurde, dass es ein verstärktes grün fluoreszierendes Protein exprimiert, das eine Visualisierung ermöglicht.

Laden Sie die Suspension in eine Spritze mit aufgesetzter Nadel.

Betäuben Sie als Nächstes einen Mäusewelpen, indem Sie ihn auf Eis legen.

Identifiziere die Injektionsstelle am Kopf des Welpen.

Führen Sie die Nadel senkrecht zur Schädeloberfläche ein, bis sie den lateralen Ventrikel, eine Zerebrospinalflüssigkeit oder einen mit Liquor gefüllten Hohlraum im Gehirn erreicht.

Injizieren Sie die Suspension in den Seitenventrikel.

Lassen Sie den Welpen sich erholen.

Das injizierte Virus zirkuliert durch den ventrikulären Liquor und erreicht die Ependymzellen des Marginalbereichs und die Epithelzellen des Plexus choroideus.

Das Virus heftet sich an Oberflächenrezeptoren auf diesen Zellen, internalisiert, repliziert sich und breitet sich von Zelle zu Zelle aus, wodurch eine akute Infektion im Plexus choroideus, im Marginalbereich und in der subventrikulären Zone entsteht.

Beginnen Sie mit der Sterilisation einer 10-Mikroliter-Spritze und einer 27-Gauge-Nadel mit 70 % Alkohol. Laden Sie dann 5 Mikroliter murine Cytomegalievirus-Injektionslösung oder fluoreszierende Mikrokügelchen in die Nadel, indem Sie vorsichtig am Kolben der Spritze ziehen.

Nachdem Sie eine P0,5-Neugeborenenmaus betäubt und immobilisiert haben, indem Sie sie drei bis vier Minuten lang auf Eis gelegt haben, verwenden Sie die Zehenkneifreaktionsmethode, um die Narkosetiefe zu bestimmen. Markieren Sie die Injektionsstelle an der anästhesierten Maus mit einem ungiftigen Laborstift an einer Stelle, die etwa 0,7 bis 1,0 Millimeter lateral der sagittalen Naht und 0,7 bis 1,0 Millimeter kaudal vom neonatalen Bregma entfernt ist. Dieses Diagramm zeigt den Standort im Detail.

Markieren Sie als Referenz 2 Millimeter von der Nadelspitze entfernt mit einem ungiftigen Marker. Führen Sie anschließend die Nadel 2 Millimeter tief senkrecht zur Schädeloberfläche an der markierten Injektionsstelle ein. Injizieren Sie dann langsam 5 Mikroliter des murinen Cytomegalievirus in den lateralen Ventrikel, ohne die Kopfhaut zu öffnen.

Bei einer anderen Gruppe von Mäusen injizieren Sie eine 5-Mikroliter-Lösung, die fluoreszierende Mikrokügelchen enthält, nach der gleichen Methode. Lassen Sie die Nadel nach der Injektion 10 bis 20 Sekunden lang an Ort und Stelle, um einen Rückfluss zu verhindern. Entferne dann langsam die Nadel. Lassen Sie die injizierten Tiere 5 bis 10 Minuten lang in einem warmen Behälter ruhen, bis die Bewegung und die allgemeine Reaktionsfähigkeit wiederhergestellt sind.