Immunpräzipitation von Zielprotein-DNA-Komplexen aus Motoneuronen-Lysat
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:55 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit vorbehandelten magnetischen Kügelchen, die mit Antikörpern beschichtet sind, die spezifisch für ein Zielprotein sind, das mit der DNA vernetzt ist.
Fügen Sie ein Motoneuron-Lysat hinzu, das DNA-Fragmente enthält, und inkubieren Sie es unter Bewegung.
Die DNA-Fragmente interagieren mit Antikörper-beschichteten Kügelchen und bilden so Kügelchen-DNA-Komplexe.
Zentrifugieren Sie, um die Flüssigkeit aus der Kappe zu sammeln, und legen Sie sie auf einen Magnetseparator, um die Kügelchen-DNA-Komplexe auszufällen.
Entfernen Sie den Überstand, der ungebundene DNA-Fragmente enthält.
Führen Sie einen Lysepuffer auf Detergenzbasis ein, um unspezifisch gebundene DNA-Fragmente zu lösen.
Zentrifugieren und magnetische Trennung durchführen, dann den Überstand entfernen.
Mit einem Puffer mit hohem Salzgehalt waschen, um unspezifische Wechselwirkungen zu stören. Zentrifuge, führen Sie die magnetische Trennung durch und entfernen Sie den Überstand.
Waschen Sie mit LiCl-Puffer, um die verbleibenden unspezifischen Wechselwirkungen zu entfernen. Zentrifuge, führen Sie die magnetische Trennung durch und entfernen Sie den Überstand.
Zum Schluss mit Tris-HCl-Puffer wasch
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