JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:08 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir fixierte zerebelläre Organoidschnitte, die aus unterschiedlichen Typen von Kleinhirnneuronen bestehen.
Waschen Sie die Abschnitte in Puffer, um Einbettmedienreste zu entfernen.
Inkubieren Sie in Glycin, um die Fixierung der verbleibenden reaktiven Stellen zu blockieren und die unspezifische Bindung während der Immunfärbung zu reduzieren.
Fügen Sie ein nichtionisches Detergens hinzu, um die Zellen zu permeabilisieren.
Mit Puffer waschen und das überschüssige Waschmittel entfernen.
Trocknen Sie nun die Folie. Übertragen Sie es in eine Immunfärbeschale mit puffergetränktem Papier, um ein Austrocknen des Gewebes zu verhindern.
Wenden Sie eine Blockierungslösung an, die an unspezifische Stellen auf den Neuronen bindet.
Entfernen Sie die Blocklösung. Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die an Zielantigene in Kleinhirnneuronen binden.
Mit Puffer waschen, dabei ungebundene Antikörper entfernen.
Inkubieren Sie mit Fluorophor-gebundenen Sekundärantikörpern, um antigengebundene Primärantikörper zu binden.
Dann mit Puffer waschen und ungebundene Antikörper entfernen.
Fügen Sie einen Farbstoff hinzu, um die Zellkerne zu färben.
Visualisieren Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikrosko
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