JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:20 Min. • July 8th, 2025
Wildtyp- und mutierte Drosophila-Gehirne werden in eine Lösung gegeben, die ein Fixiermittel und ein Detergens enthält. Inkubieren Sie mit leichtem Schaukeln.
Das Fixiermittel bewahrt die Morphologie des Gewebes, während das Detergens die Zellmembranen permeabilisiert.
Lassen Sie das Gehirn sich beruhigen und entfernen Sie dann die Lösung.
Waschen Sie die Taschentücher mit einem Puffer.
Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Entfernen Sie die Lösung und fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf ein spezifisches Protein abzielen, das die axonale Entwicklung in den Neuronen des Pilzkörpers (MB) des Gehirns reguliert.
Inkubieren, um die Antikörperbindung zu fördern.
Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Inkubieren Sie mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die auf die Primärantikörper abzielen.
Waschen Sie erneut, um ungebundene Antikörper zu entfernen, und resuspendieren Sie das Gehirn dann in einem Einbettmedium.
Montieren Sie die Gehirne auf einen Brückenschlitten und visualisieren Sie sie unter einem Fluoreszenzmikroskop.
Im Vergleich zum Wildtyp weisen die mutierten Gehirne einen defekten P
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