JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:59 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie fixierte Gehirnschnitte von Mäusen, die neuronale Zellen enthalten, einschließlich proliferierter neuraler Stammzellen, die mit EdU, einem Thymidin-Analogon, markiert sind.
Umranden Sie die Abschnitte mit einer hydrophoben Markierung, um eine Ausbreitung der Lösung zu verhindern.
Fügen Sie ein Reinigungsmittel hinzu, um das Gewebe zu permeabilisieren. Waschen, um überschüssiges Waschmittel zu entfernen.
Fügen Sie ein Fluorophor hinzu, um das EdU zu markieren. Entfernen Sie die überschüssigen Fluorophore.
Bestätigen Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop die korrekte Färbung der EdU-markierten Zellen.
Tragen Sie einen Blockierungspuffer auf, der Proteine enthält, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern. Entfernen Sie die überschüssigen Proteine.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die an bestimmte Proteine in neuralen Stammzellen binden. Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper.
Fügen Sie Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper hinzu, um die Primärantikörper zu binden. Waschen Sie die ungebundenen Antikörper ab.
Färbe die Zellkerne mit einem Farbstoff und entferne den überschüssigen Farbstoff.
Entfernen Sie die hydrophobe Markierung, bringen Sie Eindeckm
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