Bestimmung der Nanopartikel-induzierten Toxizität in Neuronen unter Verwendung von Mikroglia als Surrogat-Biosensor
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:51 Min. • July 8th, 2025
Entnehmen Sie Mikrogliakulturen in einer Multiwell-Platte, die Medien enthält.
Ersetzen Sie die Hälfte des Mediums in der Testvertiefung durch Medien, die Silbernanopartikel enthalten, und in der Kontrollvertiefung durch Fahrzeugmedien. Ausbrüten.
Die Mikroglia internalisieren die Nanopartikel, werden aktiviert und setzen entzündungsfördernde Zytokine frei.
Das Vehikelmedium und das konditionierte Medium, das diese Zytokine enthält, werden in Filter umgefüllt, die auf Sammelröhrchen angebracht sind.
Zentrifuge, um die Nanopartikel zu entfernen, wobei die Zytokine erhalten bleiben.
Drehen Sie die Filter in neue Sammelrohre um, zentrifugieren Sie und sammeln Sie das Medium. Fügen Sie frische Medien hinzu.
Nehmen Sie als nächstes hypothalamische neuronale Kulturen.
Ersetzen Sie die Hälfte des Kontroll-Well-Mediums durch Fahrzeug-Medien und das Test-Well-Medium durch konditionierte Medien. Ausbrüten.
Die Zytokine binden an Rezeptoren auf hypothalamischen Neuronen und aktivieren so Signalwege, die den neuronalen Tod induzieren.
Resazurin zugeben und inkubieren.
In lebenden Zellen reduzieren Dehydrogenase-Enzyme das schwach fluoreszierende Resazurin zu fluoreszierendem Resorufin.
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