Induktion eines akuten Pons-Infarkts in einem Rattenmodell mittels Elektrostimulation

Sichern Sie eine anästhesierte Ratte in einer stereotaktischen Einheit.

Entfernen Sie das Fell von der Kopfhaut und desinfizieren Sie die Schnittstelle. Machen Sie einen Schnitt in der Mittellinie und ziehen Sie die Haut zurück, um den Schädel freizulegen.

Entfernen Sie das Bindegewebe, um eine Beeinträchtigung des Bohrers zu vermeiden. Identifizieren Sie das Bregma als Referenzpunkt, um die Koordinaten des Pons zu bestimmen, einer Struktur, die sich im Hirnstamm befindet.

Bohre ein Loch in den Schädel.

Führen Sie eine Sonde durch das Loch, um die Pons zu erreichen.

Schließen Sie als Nächstes die Elektroden an einen elektrischen Stimulator an, befestigen Sie die Anode an der Sonde für die Hirnstimulation und die Kathode an dem Ohr der Ratte, um den Stromkreis zu vervollständigen.

Geben Sie einen elektrischen Impuls an die Pons ab, der eine lokalisierte Gewebeschädigung oder einen Infarkt auslöst.

Lassen Sie die Sonde nach der Stimulation kurz an Ort und Stelle, um den Stimulationseffekt zu stabilisieren.

Entfernen Sie dann langsam die Sonde und versiegeln Sie die Operationsstelle mit Knochenzement.

Vernähen Sie den Schnitt und bringen Sie die Ratte zur Genesung und neurologischen Analyse in ihren Käfig zurück.

Heizen Sie das Heizkissen unmittelbar vor der Narkose auf 37 Grad Celsius vor und befestigen Sie den Schädelbohrer an der Halterung am stereotaktischen Rahmen. Bestätigen Sie eine mangelnde Reaktion auf den Pedalreflex bei der ersten anästhesierten Ratte und montieren Sie die Ratte in Bauchlage auf dem Heizkissen auf den stereotaktischen Rahmen. Positionieren Sie die Ohrbügel über dem Gehörgang, um den Kopf zu sichern, und achten Sie darauf, dass der Schädel horizontal gehalten wird, um eine Verzerrung der Injektion zu vermeiden.

Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und verwenden Sie einen Mikrorasierer, um die Haare vom Schädel zu entfernen. Ziehe mit einem Marker eine 3 Zentimeter lange Linie entlang der Mittellinie des Schädels von der Linie des bilateralen Canthus bis 0,5 Zentimeter hinter der hinteren Fontanelle, und mache mit einem Skalpell einen Mittellinienschnitt entlang der markierten Linie. Verwenden Sie ein Wattestäbchen, um jegliches Blut zu entfernen, und legen Sie ein Stück chirurgisches Klebeband auf jede Seite des Hautlappens, um den Schädel freizulegen.

Verwenden Sie einen neuen, mit 0,9 % Natriumchlorid getränkten Tupfer, um das Bindegewebe vorsichtig aus dem Schädel zu entfernen und das Bregma zu lokalisieren. Verwende einen Filzstift mit feiner Spitze, um den Mittelpunkt des Bregmas als Ursprungspunkt zu markieren. Platzieren Sie den Bohrer in einem Abstand von 6 Millimetern anterior-posterior, 2 Millimeter in einem medial-lateralen Abstand. Verwenden Sie den Bohrer, um vorsichtig eine Kraniotomie mit einem Durchmesser von 1 Millimeter durchzuführen. Ersetzen Sie als Nächstes den Bohrer durch eine 22-Gauge-Sonde mit isolierter Schleuse, wobei die Spitze 2 Millimeter über dem proximalen Ende der Schleuse platziert wird.

Führen Sie die Hülle 7 Millimeter in das Gehirn ein und schieben Sie die Sonde entlang der Schleuse voran, bis die Spitze der Sonde 9 Millimeter unter der Oberfläche des Gehirns liegt. Schließen Sie die Elektroden an einen elektrischen Stimulator an und verbinden Sie die Anode mit der Sonde. Verbinden Sie dann die Kathode mit dem Ohr der Ratte. Schalten Sie als Nächstes den elektrischen Stimulator ein und stellen Sie die Einzelimpulsbreite auf 4.050 Millisekunden, die Spannung auf 50 Volt und den Strom auf 4 Milliampere ein.

Lassen Sie die Sonde nach der Stimulation fünf Minuten lang in Position, bevor Sie das Gerät aus dem Gehirn entfernen. Decken Sie die Kraniotomie mit Knochenzement ab und lassen Sie den Zement trocknen, bevor Sie 4-0 Polyamid-Nahtfilamente verwenden, um die Wunde zu schließen. Binden Sie nach drei oder vier Stichen 2-1-1 chirurgische Standardknoten. Injizieren Sie dann der Ratte intraperitoneal 250 Mikroliter Penicillin und überwachen Sie die Ratte alle 15 Minuten, bis sie vollständig wach ist, bevor Sie das Tier in ihren Käfig zurückbringen.