JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:27 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir primäre neurale Stamm- und Vorläuferzellen und Neuronen, die Sialoglykoproteine aufweisen, die mit einem Sialinsäure-Reporter markiert sind.
Fügen Sie Paraformaldehyd hinzu, um die Zellen zu fixieren. Entfernen Sie überschüssiges Paraformaldehyd mit Puffer.
Inkubieren Sie mit einem Reaktionsgemisch, das chemische Sonden auf Biotinbasis, ein Reduktionsmittel und einen Katalysator auf Metallbasis enthält.
Das Reduktionsmittel aktiviert den Katalysator und erleichtert die Biotinylierung von Sialglykoproteinen.
Das Reaktionsgemisch entfernen und mit Puffer waschen. Fügen Sie Fluorophor-konjugiertes Streptavidin hinzu, um die biotinylierten Sialglykoproteine zu binden.
Das ungebundene Streptavidin entfernen und mit Puffer waschen. Fügen Sie Proteine und ein nichtionisches Detergens hinzu, um unspezifische Stellen zu blockieren und die Zellen zu permeabilisieren.
Entfernen Sie diese Lösung und inkubieren Sie sie mit Primärantikörpern, die auf bestimmte zelluläre Proteine abzielen.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper.
Inkubieren Sie mit Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern und einem Fluoreszenzfarbstoff, um proteingebundene Primärantikörper zu binden und die Zellkern
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