JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:25 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer adhärenten Neuronenkultur, die mit Alpha-Synuclein oder Alpha-S-Aggregaten behandelt wird, bei denen es sich um Klumpen eines fehlgefalteten Proteins handelt.
Diese Klumpen aggregieren zu intrazellulären Einschlüssen.
Ersetzen Sie das Medium durch eine Fixierlösung, um die zelluläre Integrität zu erhalten.
Entfernen Sie die Fixierlösung und waschen Sie sie mit Puffer.
Fügen Sie als Nächstes ein Tensid hinzu, um die Zellmembran zu permeabilisieren.
Entfernen Sie das Tensid und waschen Sie es mit Puffer.
Führen Sie eine Blockierungslösung ein, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Inkubieren Sie nun mit primären Antikörpern, die spezifisch an Alpha-S-Einschlüsse und Strukturproteine binden.
Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Inkubieren Sie mit fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörpern.
Entfernen Sie ungebundene Antikörper.
Füge einen fluoreszierenden Farbstoff hinzu, um den Zellkern zu markieren.
Entfernen Sie den Fleck und waschen Sie ihn mit Puffer.
Montieren Sie das Deckglas mit Neuronen mit Hilfe von Montagemedien auf einer Folie.
Beobachten Sie unter einem Fluoreszenzmikroskop immunmarkierte Alpha-S-Einschlüsse inn
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