JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:56 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem betäubten erwachsenen Zebrafisch.
Übertragen Sie den Fisch auf einen Silikonstifthalter und tragen Sie eine Schicht synthetisches Polymer auf, um das Auge zu befeuchten.
Positionieren Sie als Nächstes eine Laserlinse vor dem Auge, um einen Laserzielstrahl auf die Netzhaut zu fokussieren.
Richten Sie den Laser auf das Auge des Zebrafisches, wodurch die Netzhaut verletzt wird.
Der Laser induziert eine thermische Schädigung und den Tod der retinalen Photorezeptorzellen und setzt damit einen degenerativen Prozess in Gang, der über Tage fortschreitet und sich vom pigmentierten Epithel der Netzhaut bis zur äußeren plexiformen Schicht erstreckt.
Als Reaktion darauf durchlaufen Müller-Gliazellen (MG) eine reaktive Gliose, die hypertroph und proliferativ wird.
Diese Zellen dedifferenzieren sich dann zu Stammzellvorläuferzellen.
Die Vorläuferzellen wandern nach und nach zur Verletzungsstelle und differenzieren sich, geleitet von räumlichen und zeitlichen Hinweisen aus der Mikroumgebung, über mehrere Tage zu reifen retinalen Zelltypen, wodurch die Regeneration der Netzhautstruktur erleichtert wird.
Bereiten Sie eine Stammlösung des Anästhetikums vor, indem Sie 400 Milligramm Tricainpulver in 97,9 Millilitern Aquarienwasser und 2,1 Milliliter eines molaren TBS auflösen. Stellen Sie auf pH 7,0 mit einem molaren Tris bei pH 9 ein. Um die Arbeitslösung herzustellen, verdünnen Sie die Tricain-Stammlösung 1 bis 25 in Tankwasser und geben Sie 50 Milliliter in eine Petrischale. Legen Sie dann den Zebrafisch für 2 bis 5 Minuten in die Narkoselösung, bis er unbeweglich wird und nicht mehr auf äußere Reize reagiert.
Übertragen Sie jeden Fisch von Hand in einen speziell angefertigten Silikonstifthalter für die Laserbehandlung.
Eine angemessene Anästhesie ist entscheidend für das Wohlbefinden des Tieres und den Erfolg des Eingriffs. Daher ist eine frisch zubereitete Tricainlösung von entscheidender Bedeutung, und die Zeit außerhalb des Wassers sollte 10 Minuten nicht überschreiten.
Stellen Sie die Ausgangsleistung des 532-Nanometer-Diodenlasers auf 70 Milliwatt, die Pulsdauer auf 100 Millisekunden und den Antennendurchmesser auf 50 Mikrometer ein. Tragen Sie dann 1 bis 2 Tropfen 2% Hydroxypropylmethylcellulose auf das Auge auf.
Achten Sie beim Auftragen von Methylcell auf das Auge darauf, dass die viskose Lösung nicht auf die Kiemen gelangt.
Verwenden Sie als Nächstes eine 2-Millimeter-Fundus-Laserlinse, um den Laserzielstrahl auf die Netzhaut zu fokussieren. Platzieren Sie vier Laserspots um den Sehnerv auf dem linken Auge und verwenden Sie das rechte, unbehandelte Auge als interne Kontrolle.