JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:30 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit transfizierten Säugetierzellen.
Diese Zellen exprimieren den Geruchsrezeptor (OR) des Geruchsneurons, einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor, zusammen mit einem cAMP-Biosensor, der eine cAMP-Bindungsdomäne enthält, die mit einer mutierten Luciferase fusioniert ist.
Entfernen Sie das Medium und waschen Sie es mit Puffer, um das restliche Medium zu entfernen.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, der ein cAMP-Biosensorsubstrat enthält. Inkubieren, um die Aufnahme des Substrats in die Zellen zu erleichtern.
Messen Sie mit einem Chemilumineszenzplatten-Reader die basale Lumineszenz der Zellen.
Geben Sie steigende Konzentrationen des Testodorierstoffs in die Vertiefungen, wobei eine Vertiefung als Kontrolle unbehandelt bleibt.
Das Odormittel bindet an den OR und löst eine Signalkaskade aus, die cAMP erzeugt.
Dieses cAMP bindet an die Bindungsdomäne des Biosensors und aktiviert die Luciferase, die mit dem Substrat interagiert, um Licht zu emittieren.
Messen Sie die Lumineszenz in Echtzeit. Eine Zunahme der Lumineszenz mit höheren Odoriermittelkonzentrationen deutet auf eine OR-Aktivierung durch den Odorant hin.
Beobachten Sie die transfizierten Zellen vor der S
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