Immunfluoreszenzfärbung neuronaler Populationen im embryonalen gastrointestinalen Trakt der Maus
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:58 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie einen fixierten, transgenen embryonalen Magen-Darm-Trakt der Maus im gewünschten Entwicklungsstadium
.Das enterische Nervensystem des Magen-Darm-Trakts umfasst enterische Neuronen und cholinerge Neuronen, die Cholinacetyltransferase exprimieren.
Diese cholinergen Neuronen exprimieren auch ein fluoreszierendes Protein, das vom Cholin-Acetyltransferase-Promotor angetrieben wird.
Inkubieren Sie den Trakt mit einem nichtionischen Detergens und Proteinen, um die Zellen zu permeabilisieren und eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Durch Primärantikörper ersetzen. Inkubieren Sie, damit die Antikörper ihre Zielproteine in den Neuronen binden können.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper und waschen Sie sie mit Puffer.
Inkubieren Sie mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, um die an Zielproteine gebundenen Primärantikörper spezifisch zu binden.
Entfernen Sie die überschüssigen Antikörper und waschen Sie sie mit Puffer ab.
Tauchen Sie den markierten Trakt in Einbettmedien, die einen Kernfarbstoff enthalten, um die Kerne zu färben. Montieren Sie nun ein Deckglas.
Mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie können Sie die Verteilung cholinerger Neuronen im Magen-
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