JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:12 Min. • July 8th, 2025
Positionieren Sie eine transgene Maus in einer dorsalen Position. Die Maus exprimiert eine mutierte Form des Alpha-Synuclein-Proteins, die zur Aggregation neigt.
Nehmen Sie eine Suspension von Alpha-Synuclein-Fibrillen, Aggregaten aus fehlgefaltetem Alpha-Synuclein-Protein.
Injizieren Sie die Fibrillen in die Bauchhöhle, um ihre systemische Verteilung zu ermöglichen.
Im Blutkreislauf angekommen, erreichen die Fibrillen das zentrale Nervensystem und binden an Endothelzellen der Blut-Hirn-Schranke.
Die Fibrillen werden über Vesikel durch die Zellen transportiert und gelangen in das Nervengewebe. Sie dringen dann durch Endozytose in die Neuronen ein und fördern die Aggregation der mutierten Alpha-Synuclein-Proteine.
Diese Aggregate werden durch Exozytose freigesetzt und breiten sich auf benachbarte Neuronen, Mikroglia und Astrozyten aus.
Die Erkennung der Aggregate veranlasst Mikroglia, reaktive Sauerstoffspezies freizusetzen, die das Gewebe schädigen, und Zytokine, die zusätzliche Immunzellen rekrutieren. Die Folge ist eine Neuroinflammation, die zum Absterben der Nervenzellen führt.
Lassen Sie die Maus sich erholen, um die Alpha-Synuclein-vermittelte Neuroinflammation zu beurteilen.
Für intraperitoneale Injektionen narkotisieren Sie die Tiere kurz in einer Anästhesiekammer mit Isofluran. Kneifen Sie erneut den Zeh des Tieres ein und vergewissern Sie sich, dass es seine Hintergliedmaße nicht zurückzieht, um eine ordnungsgemäße Anästhesie zu gewährleisten. Füllen Sie eine 27-Gauge-Einweg-Injektionsspritze mit 50 Mikrolitern beschallten Alpha-Synuclein-Fibrillen oder PBS.
Halten Sie das Tier in einer dorsalen Position, wobei der Kopf vom Untersucher weg und in einem Winkel von etwa 45 Grad nach unten zeigt. Direkt in das Bauchfell der Maus injizieren, ohne in den Dünndarm oder den Blinddarm hinter der Bauchdecke einzudringen. Überwachen Sie die Tiere, bis sie sich von der Narkose erholt haben.