Zeitraffer-Bildgebung zur Überwachung der transzellulären Ausbreitung prionenähnlicher Proteine in transgenen Nematoden
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:11 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir transgene Nematoden, die im gleichen Entwicklungsstadium gehalten werden.
Die Körperwandmuskelzellen dieser Nematoden exprimieren prionenähnliche Proteine, die mit einem rot fluoreszierenden Protein markiert und in sauren Vesikeln lokalisiert sind.
Prionenähnliche Proteine sind fehlgefaltet und aggregieren Proteine, die mit neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung gebracht werden.
Übertragen Sie anschließend die Nematoden auf ein Agarose-Pad, das polymere Nanopartikel und eine Anästhesielösung enthält.
Die kombinierte Wirkung der Nanopartikel und der Anästhesielösung immobilisiert die Nematoden auf dem Agarose-Pad.
Legen Sie ein Deckglas über das Agarose-Pad und versiegeln Sie es.
Positionieren Sie nun die Agarose-Pad-Anordnung mit den Nematoden unter einem Konfokalmikroskop und stellen Sie die entsprechenden Bildgebungsparameter ein.
Nehmen Sie Zeitrafferbilder der fluoreszenzmarkierten Proteine in den Nematoden auf, um den vesikulären Transport der prionenähnlichen Proteine innerhalb und zwischen den Muskelzellen der Körperwand zu überwachen.
Nach der Herstellung synchronisierter transgener Linien der C. elegans-Kontrolle und der Prionendomäne und 10% Agarose-Pads
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