JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:36 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer gefrorenen postmortalen menschlichen Hirngewebeprobe aus einem bestätigten Fall von neurodegenerativer Erkrankung.
Excise graue Substanz, die reich an unlöslichen Proteinaggregaten ist, ein Kennzeichen der Krankheit.
Übertragen Sie das Gewebe in einen Homogenisator.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, der Inhibitoren enthält, und homogenisieren Sie, um intrazelluläre Komponenten freizusetzen.
Die Inhibitoren blockieren Protease- und Phosphatase-Enzyme und verhindern so den Proteinabbau.
Füllen Sie das Homogenat in ein Röhrchen und fügen Sie einen ionischen Detergenspuffer hinzu. Ausbrüten.
Das Detergens löst nativ gefaltete Proteine auf, während fehlgefaltete Proteinaggregate intakt bleiben.
Beschallt, um die zelluläre Dissoziation zu vervollständigen.
Übertragen Sie das Homogenat in ein Ultrazentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie es mit hoher Geschwindigkeit.
Die Zuschlagstoffe setzen sich am Boden ab.
Entfernen Sie den Überstand, der waschmittellösliche Proteine enthält.
Waschen Sie die Zuschlagstoffe mit einem ionischen Waschmittelpuffer, zentrifugieren Sie sie und entfernen Sie den Überstand.
Fügen Sie Harnstoffpuffer hinzu, um die Proteinaggregate zu denat
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