Bewertung der motorischen Funktion in einem experimentellen Mausmodell für Autoimmunneuritis

Platzieren Sie eine Maus auf einem Laufband, um seine Laufbewegung aufzuzeichnen und seine motorische Funktion zu bewerten, die die Fähigkeit darstellt, Körperbewegungen zu kontrollieren.

Nach dem Test injizieren Sie Pertussis-Toxin in die Bauchhöhle der anästhesierten Maus, um ihre Blut-Nerven-Schranke zu schwächen.

Entfernen Sie als Nächstes die Haare zwischen den Schulterblättern der Maus, desinfizieren Sie den Bereich und injizieren Sie myelinähnliche Peptide mit einem Adjuvans in das Unterhautgewebe.

Wiederholen Sie beide Injektionen für optimale Reaktionen.

Die Peptide stimulieren antigenpräsentierende Zellen, die zu den Lymphknoten wandern und autoreaktive T-Zellen produzieren.

Diese T-Zellen gelangen in den Blutkreislauf, überwinden die gestörte Blut-Nerven-Schranke und zielen auf periphere Nerven ab, was zur Freisetzung von Zytokinen führt.

Dies lockt Makrophagen und B-Zellen an, die Effektormoleküle freisetzen, die die Myelinscheide abbauen.

Der Abbau von Myelin beeinträchtigt die Signalübertragung der Nerven und das Auftreten einer experimentellen Autoimmunneuritis (EAN).

Wiederholen Sie abschließend den Laufbandtest. Die Maus zeigt Schwierigkeiten beim Laufen und Koordinieren von Gliedmaßenbewegungen, was auf eine motorische Dysfunktion hinweist.

Schalten Sie drei Tage vor der Krankheitseinleitung das Gerät zur Beurteilung der motorischen Funktion ein und schalten Sie die Lichttaste ein. Nimm die Maus und senke sie auf einen Behälter mit roter Lebensmittelfarbe. Platzieren Sie die Maus in das Gehfach und stellen Sie die Laufbandgeschwindigkeit auf 15 Zentimeter pro Sekunde ein. Schalten Sie das Laufband ein und klicken Sie auf "Aufnahme", um das Gangfunktions-Bildgebungssystem zu verwenden, um die Laufbewegung der Maus 36 Sekunden lang aufzuzeichnen.

Stoppen Sie nach 36 Sekunden die Aufzeichnung und das Laufband und speichern Sie die Videodatei des Übungslaufs im dafür vorgesehenen Ordner.

Einen Tag vor der ersten Immunisierung verwenden Sie eine 0,5-Milliliter-Spritze, die mit einer 30_1/2-Gauge-Nadel ausgestattet ist, um 1,6 Mikrogramm pro Milliliter Pertussis-Toxin in 250 Mikroliter isotonisches PBS-IP der Maus zu verabreichen, um sechs bis acht Wochen alte männliche C57-Black-6-Mäuse zu betäuben.

Kombinieren Sie am nächsten Tag gleiche Volumina frisch zubereiteter Peptidlösungen in 0,9% iger Kochsalzlösung und 20 Milligramm pro Milliliter Mycobacterium tuberculosis in vollständigem Freund-Adjuvans in einem Rührbesen und mischen Sie die Lösungen bei maximaler Geschwindigkeit für 1 Minute bei Raumtemperatur.

Laden Sie eine Spritze, die mit einer 23-Gauge-Nadel ausgestattet ist, mit dem Inokulum, drehen Sie die Spritze um und schütteln Sie sie, bevor Sie die Luft aus dem Spritzenschaft evakuieren.

Entfernen Sie vor der Abgabe des Inokulums die Haare seitlich der Mittellinie zwischen den Schulterblättern und desinfizieren Sie die exponierte Haut mit 70% Ethanol.

Fassen Sie dann mit einer Addison-Pinzette die Haut und geben Sie der mit Pertussistoxin injizierten Maus 50 Mikroliter der Lösung per subkutaner Injektion zu.

Am nächsten Morgen verabreichen Sie 1,2 Mikrogramm pro Milliliter Pertussis-Toxin in 250 Mikrolitern PBS IP, wie gerade gezeigt, gefolgt von weiteren 1,2 Mikrogramm pro Milliliter Injektion von Pertussis-Toxin IP 48 Stunden später.

Drei Tage später, nach der dritten Pertussis-Injektion, verabreichen Sie weitere 50 Mikroliter frisch zubereitetes Inokulum an der gleichen Injektionsstelle wie zuvor und überwachen Sie den klinischen Score und die motorische Funktion der Tiere zweimal pro Woche bis zum Ende des Versuchs.